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離心機的重要性從實驗中體現

发布时间:2021-8-13 12:1:46??????点击:

  離心機可以讓你實現一種簡易快速提取細菌(含革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌)和酵母染色體DNA的方法。

  實驗中,效率是關鍵,比如快速獲取微生物基因組DNA在基因克隆、重組子的篩選以及分類學中十分必需。

  接下来介绍一种采用本法所提染色体DNA,可直接应用于常规的分子生物学实验,包括PCR、限制性内切酶的切割,以及基因组文库的构建。其中,有个关键性实验设备——離心機,少了它可不行。

  1、 取1ml过夜培养菌液于8000g,離心機离心2min。去除培养基后,用400ul STE缓冲液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重悬菌体,按相同条件离心清洗菌体两次。

  2、 收集的菌体用200ul TE缓冲液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)悬起后加约50mg 直径425-600um 规格的玻璃珠,再加入100ul Tirs饱和苯酚。

  3、 上述混合液在漩涡振荡器上振荡(细菌,振荡60s;酵母,振荡120s-200s),随后于4℃,13000g,离心5min。

  4、 吸取上层水相(约160ul)转移至一个新的离心管中,加TE缓冲液补至200ul,再加入100ul氯仿混匀后,于4℃,13000g,离心5min。重复此步两到三次。

  5、 转移上层水相(约160ul)至一个新的离心管中,补加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。

  6、 加入100ul 氯仿混匀于4℃,13000g,離心機离心5min。

  7、 转移上层水相(约150ul)至一个新的离心管中。

  8、 至此,上层水相即含有纯化好的基因组DNA,可直接用于随后的常规分子生物学实验。

  以上就是简单的实验讲解,如果您想多多交流,可以前来我司参观,我司生产供应多种離心機,还能提供定制。


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