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拒絕汙染與變性!離心機分離要點總結

发布时间:2021-3-1 13:10:53??????点击:

  從相關文獻資料了解到離心機的離心分離方法還是以它的分離範圍廣,容量等優勢存在著;可以研究天然生物大分子的流體動力學特性;可以在電離介質中進行生物大分子的片段分離;對緩沖劑限制很小(在電泳技術中由于電流的熱效應而限制了緩沖劑的使用)等等。另外在各種實驗方法的前處理階段,離心法還是被廣泛的使用著。考慮到各個研究部門的設備分布情況,在很多條件下,離心分離的使用還具有相當的廣泛性。作爲有效的分離純化方法,差分離心、速率區帶密度梯度離心和等密度離心在生物大分子的研究中還占有重要地位。

  離心機分离要点:

  1) 防止污染:

  要避免在實驗過程中由于生物大分子部分受損而引起降解或變性,引起降解的原因很多,如實驗過程中的外力作用;某些酶汙染等等,但最常見的原因是酶的作用。

  實驗過程中由于汙染某些脫氫酶進入樣品而使生物大分子變性。

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  (2) 避免变性的其他注意事项:

  (i)转头在离心前预冷到接近离心温度(在冰箱中放置过夜,或在恒温箱中保温)。对于超速離心機,其制冷系统主要用于抵消转头在稀薄空气中高速运转(转头表面线速度从亚因速—>超因速)时气动力摩擦产生的热量。在真空中,只有辐射传热的情况下,高速运转的转头温度从室温(如夏天30~35℃)降到5℃时间很长(如1 小时左右)一般应预冷到接近离心温度(±2℃)以确保在离心的最初阶段(15 分钟以内)转头温度和样品温度一致。

  (ii)用固定角式或近垂直管转头或垂直管转头作梯度离心时必须利用離心機的慢加速(0~500rpm )、慢减速(500rpm~0)功能,以保证梯度方向的顺利转换。

  (iii)離心開始、離心結束都要小心地輕放和輕取離心管,避免大的震動。

  (iv)卸樣過程應在無震動的實驗台上進行,環境溫度和離心溫度相近,卸樣方法應選擇平穩、外力作用很小的方式,盡可能不用泵輸送樣品。

  3) 梯度离心也有其相关要点,这一块内容相对复杂,要参考很多文献资料,感兴趣得朋友可以自行去了解一下:

  (1)B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

  (2)M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

  (3)D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

  (4)C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

  (5)余興明,"質粒DNA的超速離心分離""生命的化學"1994.1

  (6)余興明"血清脂蛋白的離心分離""生命的化學"1997.3

  (7)余興明"離心技術"設備與方法概論上海生物物理學會1986,1993年)。

  以上就是关于離心機得简单解说,離心機虽然只是一款小型分离设备,但是它得作用,价值,是很大得,所以要多了解離心機才能多发掘它得作用与价值!


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